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Takara科学家带您解读《Nature》重磅:CRISPR背T细胞革新迈出伟大一步
 
 
简介:《Nature》杂志宣布突破性研讨,Alexander Marson传授和他的同事经由过程电转的体式格局高效革新了T细胞,敏捷改正了T细胞中自体免疫相干的遗传突变;同时经由过程那一要领对泉源于健康供体的T细胞停止了重编程,经由重编程的T细胞正在体外和体内模子中都胜利天靶向了癌细胞。
 
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多年来,研究人员一向正在探究T细胞基因重组的可能性,以用于临床运用,如癌症免疫医治、遗传性疾病基因改正和病原体抗药性研讨等。固然CRISPR/Cas9基因组编纂手艺的生长为T细胞革新供应了强有力的新型要领,但因为这种方法依赖于经由过程病毒去通报同源定向修复(HDR)模板,存在基因组随机整合所能够发生的风险,另有局部缘由是因为单链DNA(dsDNA) 正在电转过程中会发生细胞毒性,使得这项手艺正在临床上的运用遭到了限定。
 
近来正在《Nature》杂志上宣布了一项突破性的研讨,Alexander Marson传授和他的同事形貌了一种高效的T细胞革新要领,经由过程共电转的体式格局将Cas9-gRNA核糖核蛋白(RNP)复合物取单链DNA(dsDNA)或单链DNA(ssDNA) HDR模板配合导入至细胞中,能够绕过病毒通报的体式格局,最大限度天低落细胞毒性。应用那一要领,作者敏捷改正了T细胞中自体免疫相干的遗传突变,这些T细胞来自于得了稀有的单基因遗传病的同胞;同时经由过程那一要领对泉源于健康供体的T细胞停止了重编程,经由重编程的T细胞正在体外和体内模子中都胜利天靶向了癌细胞。
 
作者正在开辟一种非病毒的T细胞重编程要领时,不只设想了一种更合适临床运用的解决方案,并且借将T细胞革新所需求的工夫从数年或数月收缩到了数周,大大低落了本钱,加速了发明的程序,扩大了发明的可能性。作者正在Cas9:HDR模板比率和电转实行前提优化上破费了大量工夫,单便这一点而言,正在将来的很多年里可能会使研讨界受益不浅。
 
早就听闻CRISPR/Cas9手艺正在T细胞革新方面具有肯定的潜力,当小编正在Takara科学家的率领下解读这篇文章的时刻,小编的心境是如许的:“终究比及您,还好我出抛却”。 若是您跟小编一样冲动,赶忙点击下方题目,相识Takara科学家是怎样解读的吧。
 
 
正在那篇展示革命性结果的文章中,有一个艳丽的身影,那就是Takara公司的Guide-it长单链制备体系,它资助作者们胜利高效天制备出了ssDNA基因敲入(knockin)修复模板。ssDNA作为CRISPR基因敲入供体模板,因为其非特同性整合概率低、细胞毒性低的特性能够轻松实现正确CRISPR基因敲入,让我们得到更加可托的基因编纂效果。关于这一点,本篇文章作者也深有体味。
 
“Similar to what has been described with viral HDR templates, we found evidence to suggest that double-stranded templates could integrate independent of target homology, albeit at low rates. These rare events could be reduced almost completely by using single-stranded DNA (ssDNA) templates”.
Roth et al. 2018
 
Guide-it长单链制备体系供应了一种轻便的要领去制备CRISPR/Cas9大概别的基因编纂手艺的基因敲入实行修复模板,能够制备长达5 kb的单链DNA寡核苷酸(500 bp-5 kb)。它挑选天消化降解单链DNA PCR产品的公理链(sense strand)大概反义链(antisensestrand),将其转化为单链DNA,经济、轻便、错误率低,是基因敲入研讨科学家们的伶俐之选。
 
 
 
《Nature》原文题目:Reprogramming human T cell function and specificity with non-viral genome targeting.
 
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Guide-it CRISPR/Cas9基因编纂完好解决方案